Jak se otestovat na listeriózu?

U těhotné ženy se při poruše buněčné imunity může bakterie v placentě množit. K intenzivnímu rozvoji infekce obvykle dochází v poslední třetině těhotenství, kdy je imunitní systém obzvláště oslaben. Listerióza může způsobit předčasný porod a smrt dítěte v děloze. Vrozená listerióza vede k rozvoji septického stavu (otrava krve bakteriemi), který má za následek smrt dítěte.

Listerióza je nejnebezpečnější pro následující skupiny populace:

• těhotné ženy;
• starší a staří lidé;
• pacienti s rakovinou;
• osoby infikované HIV a AIDS;
• pacienti, kteří dlouhodobě užívají kortikosteroidy;
• osoby, které užívaly imunosupresiva během transplantace tkání a orgánů;
• narkomani a alkoholici.

K provedení vyšetření je využívána metoda polymerázové řetězové reakce, která umožňuje ve studovaných vzorcích biomateriálu identifikovat specifické fragmenty DNA Listeria monocytogenes.

Součástí diagnostického komplexu pro identifikaci listeriózy jsou studie epiteliálních buněk urogenitálního traktu, moči, epiteliálních buněk nosní sliznice a orofaryngu na přítomnost specifických fragmentů DNA Listeria monocytogenes.

Vyšetřením epiteliálních buněk urogenitálního traktu se potvrzuje, že listerie je příčinou recidivujících nebo chronických zánětů urogenitálního traktu (močových cest).

Test moči potvrzuje, že Listeria je původcem pyelonefritidy, nespecifického zánětu ledviny s poškozením jejich tubulárního systému.

Vyšetřením buněk nosní sliznice se potvrzuje, že příčinou rozvoje respiračního onemocnění je infekce Listeria monocytogenes.

Vyšetřením epiteliálních buněk sliznice orofaryngu se potvrdí anginózní forma infekce.

Analytické ukazatele testu:

• studovaná oblast je charakteristickým fragmentem DNA Listeria monocytogenes;
• specifičnost studie – 100 %;
• Citlivost metody je 2000 kopií na mililitr testovaného vzorku.

Urogenitální seškrab (cervikální kanál, pochva, močová trubice)

Výtěry od žen se odebírají nejdříve pátý den od začátku menstruačního cyklu a nejpozději pátý den před očekávaným datem další menstruace. Pokud jsou pozorovány zjevné známky onemocnění, vzorek se odebírá přímo v den ošetření.

Požadavky na přípravu testu:

• den před a bezprostředně v den odběru vzorků je vaginální výplach zakázán;
• v předvečer studie je zakázáno používat vaginální léky – masti, čípky atd.

Není odebrán žádný vzorek:

• souběžně s perorálním nebo lokálním užíváním antibiotik – po ukončení léčby by měly uplynout nejméně dva týdny s lokální terapií a 30 dní po vnitřním použití antibakteriálních léků;
• během menstruace;
• dříve než 24-48 hodin po pohlavním styku;
• po intravaginálním ultrazvuku;
• po kolkoskopii (diagnostické vyšetření poševního otvoru, jeho stěn a děložního čípku pomocí speciálního přístroje – kolposkopu);
• po ručním vyšetření a jiných manipulacích.

Urethra (močová trubice)

U osob obou pohlaví se odběr provádí nejdříve 14 dní po užití topických antibiotik a 30 dní po perorálním podání antibakteriálních látek.

Týden před zákrokem se doporučuje vysadit všechny léky. Není-li odmítnutí léčby možné, musí pacient informovat specialistu, který ho posílá na vyšetření.

Nemějte pohlavní styk ani masturbujte po dobu 48 hodin.

Při výběru epiteliálních buněk z močové trubice se manipulace provádí před močením nebo 2-3 hodiny po něm (u silného výtoku z močové trubice u mužů – po 1 hodině).

Část první ranní moči, vyloučená nejdříve 2-3 hodiny po předchozím (nočním) močení, se odebere pro analýzu. Jeho objem by měl být asi 20-30 ml. Nádoba používaná ke sběru biomateriálu je sterilní lékařská nádoba.

Moč se odebírá buď před chemoterapií nebo léčbou antibiotiky, nebo měsíc po ukončení léčby.

Před zahájením manipulace musíte důkladně umýt genitálie. Je vhodné, aby ženy používaly hygienický tampon, aby se do vzorku nedostal poševní hlen. Během menstruace se materiál nesbírá.

Po naplnění nádoby o třetinu až polovinu jejího objemu se nádoba s močí pevně uzavře víčkem, aby nevytékala.

Dodávka biomateriálu musí být organizována maximálně do 6 hodin. Před odesláním do laboratoře může být moč uložena buď v lednici (při teplotě +2⁰С – nelze ji zmrazit) nebo v místnosti, ale teplota by neměla být vyšší než +25⁰С.

• před diagnostickými manipulacemi v místě podezření na infekční agens;
• před zahájením lokální terapie v možné oblasti, kde je přítomen mikroorganismus;
• před zahájením celkové antibakteriální léčby.

Před odběrem biologického materiálu je třeba zvážit následující:

• škrábání buněk odebraných pro diagnostické účely se provádí před zahájením užívání antibakteriálních, antivirových a antiparazitárních léků, jakož i před provedením jakýchkoli terapeutických nebo diagnostických opatření;
• odběr vzorků ke sledování účinnosti terapie se provádí nejméně jeden a půl až dva týdny po ukončení užívání lokálních léků a nejméně měsíc po celkové léčbě.

Při přípravě na škrábání:

• během 6 hodin před odběrem vzorku je zakázáno použití resorpčních přípravků a/nebo aerosolů k výplachu orofaryngu;
• Je zakázáno používat žvýkačky nebo pastilky k osvěžení dechu;
• Je zakázáno čistit si zuby.

Před škrábáním si musíte vypláchnout ústa vodou pokojové teploty.

Pro získání správného výsledku testu musí být přesně splněny všechny tyto podmínky. Ošetřující lékař může doporučit další podmínky vyšetření.

• při podezření na listeriózu u pacientů s akutními střevními infekcemi;
• pokud existují známky poškození membrán mozku, pokud v minulosti došlo k infekčním onemocněním;
• s chronickým (recidivujícím) zánětem urogenitálního traktu;
• pro jemné příznaky u rizikových osob (viz popis testu).

Tento test je kvalitativní, výsledek je uveden ve tvaru „detekováno“ nebo „nezjištěno“.

Normou je absence specifických fragmentů DNA Listeria monocytogenes v testovaném vzorku.

• Ve studovaných vzorcích byly nalezeny specifické fragmenty DNA Listeria monocytogenes, což svědčí o infekci bakterií.

• specifické fragmenty DNA Listeria monocytogenes nebyly detekovány;
• množství infekčního agens je pod prahem detekce.

Výsledek analýzy je vydán na hlavičkovém papíře laboratoře lékařské společnosti „Nauka“. Příklad výsledku této analýzy je uveden níže:

CELÉ JMÉNO.: Ivanov Ivan Ivanovič Pohlaví: м Rok narození: 01.01.0000

Datum výzkumu: 12.12.0000

Výzkum

Výsledek

Normy interpretace

Poznámka

[26] Listeria monocytogenes [kval.]

Listerióza je infekční onemocnění, které způsobuje nejvirulentnější alimentární infekce. Listerióza je běžná u zvířat i lidí. Vyznačuje se mnoha zdroji infekce, různými cestami a faktory jejího přenosu, mnohočetnými formami projevů a vysokou mortalitou. Listerióza celosvětově postihuje tisíce lidí, z nichž 20 až 30 % zemře. Úmrtnost na těžké běžné formy onemocnění dosahuje 90 – 100 %. Včasná diagnostika listeriózy umožňuje předepsat adekvátní léčbu, která zajistí pacientovi úplné vyléčení.

Rýže. 1. Na fotografii je pacient s listeriovou meningitidou.

Polymorfismus klinických projevů a nemožnost identifikace zdroje infekce v některých případech vytváří výjimečné obtíže při stanovení diagnózy na základě klinických a epidemiologických dat. V tomto ohledu se stává zásadní laboratorní diagnostika listeriózy. Předběžná diagnóza je stanovena na základě bakterioskopického vyšetření, konečná diagnóza vyžaduje bakteriologické potvrzení nebo PCR.

Pro výzkum používáme:

• Vzorky krve, nosohltanový hlen, výtok z očí, punkce lymfatických uzlin, stolice.
• U žen, které porodily mrtvé dítě nebo se známkami listeriózy, se vyšetřuje placenta, plodová voda a výtok z porodních cest.
• Meconium je testováno u novorozenců.
• U pacientů s podezřením na listeriovou meningitidu se vyšetřuje mozkomíšní mok.
• Z mrtvol se odebírá nejrůznější biologický materiál.
• Pro stanovení bakteriálního nosičství se odebírají výkaly a orofaryngeální výtěry.

Diagnostika listeriózy pomocí prosté a fluorescenční mikroskopie

Rýže. 2. Pohled na Listerii pod mikroskopem. Bakterie jsou umístěny jednotlivě nebo v párech, méně často v krátkých řetězcích. Při obarvení Gramovým barvivem se Listeria jeví jako růžová.

Rýže. 3. Listerie ve světle mikroskopu, který poskytuje trojrozměrné zvětšení, vypadá jako válce.

Rýže. 4. Listerie v makrofázích.

Mikroskopie listeriových granulomů

Snížení fungování buněčné imunity vede k šíření infekce po celém těle. V orgánech a tkáních se tvoří specifické granulomy — listeriomy. Jejich specifické složení je určeno mikroskopií nátěru nebo biopatu.

Rýže. 5. Granulomy v játrech (foto vlevo). Granulom (listeriom) v mozku (foto vpravo).

Názor lékaře:

Diagnostika listeriózy je komplexním a důležitým krokem k zajištění účinné léčby tohoto onemocnění. Lékaři jsou povinni vzít v úvahu klinické příznaky, výsledky laboratorních a instrumentálních studií a také anamnézu kontaktu s možnými zdroji infekce. Klíčovými metodami pro diagnostiku listeriózy jsou bakteriologické vyšetření, polymerázová řetězová reakce (PCR) a sérologické testy. Je důležité si uvědomit, že včasná diagnóza umožňuje zabránit rozvoji komplikací a poskytnout adekvátní léčbu.

Laboratorní diagnostika listeriózy pomocí bakteriologického vyšetření

Listeria roste při pokojové teplotě na běžných živných půdách – mírně zásaditých a neutrálních. Plodiny se doporučuje provádět v prvních 7 – 10 dnech onemocnění. Inkubace trvá 3 týdny při teplotě 37 °C. Při nanášení na glukózo-krevní agar se vyberou typické kolonie (průhledné nebo rohovité), které produkují hemolýzu.

Rýže. 6. Kolonie Listeria při výsevu na masový peptonový agar připomínají kapky rosy. V procházejícím světle získávají kolonie perleťový odstín.

Rýže. 7. Když Listeria roste na chromogenním agaru, získávají kolonie modrou barvu.

Rýže. 8. Při pěstování na Oxfordském agaru se kolem kolonií tvoří černé halo.

Rýže. 9. Když Listeria roste v masovo-peptonovém vývaru, vytváří se zákal s mírnou opalescencí.

Diagnostika listeriózy pomocí biologických vzorků

Biologické testy jsou založeny na infikování laboratorních zvířat biologickým materiálem odebraným od pacienta za účelem zjištění bakterií. Bílé myši, králíci, morčata a stepníci jsou vystaveni infekci.

Rýže. 10. Na fotografii jsou bílé myši infikované listeriózou. Uprostřed je zdravá myš. Napravo a nalevo od něj jsou kojené myši s ochrnutím předních nohou.

Rýže. 11. Na fotografii vlevo se listerióza u králíka rozvinula po nitrožilní infekci. Fotografie vpravo ukazuje zánětlivou reakci, která se vyvinula v místě intradermální injekce Listeria.

Názor pacienta

Při podezření na listeriózu se mnoho lidí obrací na zkušenosti ostatních, aby získali informace o příznacích, diagnóze a léčbě nemoci. Lidé často sdílejí své zkušenosti na fórech a sociálních sítích, diskutují o tom, jaké testy jim byly předepsány, jaké příznaky pozorovali a jak probíhala léčba. Tato zkušenost může být užitečná pro ty, kteří čelili podobným problémům, pomůže jim pochopit, co dělat v podobné situaci a jak vyhledat lékařskou pomoc.

Protilátky proti listeriím

Protilátky proti listeriím se stanovují pomocí sérologických reakcí: aglutinační reakce (RA), nepřímá hemaglutinační reakce (IRHA) a reakce fixace komplementu (CFR) s listeriovým antigenem v párových sérech. Pokud má pacient listeriózu, zaznamená se zvýšení titru 4krát nebo více. Reakce se provádějí dvakrát s 2týdenní přestávkou.

Vzhledem k antigennímu vztahu Listeria a Staphylococcus mohou být získány falešně pozitivní výsledky.

Po 2 týdnech od začátku onemocnění jsou v krvi pacienta detekovány protilátky IgG, které jsou v krvi přítomny po celou dobu onemocnění. Protilátky při chronické listerióze zůstávají v krvi dlouhou dobu.

Fluorescenční protilátková metoda

Imunofluorescenční reakce (RIF) je rychlá a vysoce citlivá metoda pro diagnostiku listeriózy. Existuje přímá a nepřímá metoda RIF. Při stanovení protilátek přímou metodou se k suspenzi mikrobů fixované na podložní sklíčko přidá sérum značené fluorochromem. Když se pod modrofialovým (ultrafialovým) světlem vytvoří komplex antigen-protilátka, bakterie září pod fluorescenčním mikroskopem jasně zeleně.

Rýže. 12. Záře Listeria během imunofluorescenční reakce.

Krev na listerii

Krevní test na Listerii je účinný způsob, jak odhalit infekci listerií. U různých forem listeriózy se v těle pacientů aktivuje systém mononukleárních fagocytů – makrofágů. Zachycují a ničí bakterie a viry žijící intracelulárně, čtou informace o jejich struktuře a předávají je T-lymfocytům. Následně B lymfocyty začnou produkovat protilátky, které zničí patogen. S onemocněním se zvyšuje počet monocytů v periferní krvi. U septické formy listeriózy dosahuje jejich počet 70 % (s normou 3 – 11 %).

Rýže. 13. Na fotografii jsou monocyty největšími buňkami v periferní krvi.

Intradermální test na listeriózu

K diagnostice listeriózy se používá intradermální (alergický) test. Antigen Listeria se podává intradermálně. Po 24 hodinách se reakce studuje. Pokud je listerie přítomna v těle testované osoby, objeví se na kůži v místě zavedení listeriového antigenu papule (infiltrát) o velikosti 10 a více milimetrů.

Intradermální test se provádí 6.–9. den od okamžiku onemocnění.

V případě ojedinělých případů listeriózy by měla být diagnóza onemocnění provedena pomocí bakteriologické metody a metody PCR.

Diferenciální diagnostika listeriózy

Diferenciální diagnostika listeriózy se provádí s přihlédnutím k rozvinuté klinické formě onemocnění.

• Listeriová tonzilitida by měla být odlišena od streptokokové tonzilitidy.
• Akutní formy listeriózy je třeba odlišit od erythema infectiosum, infekční mononukleózy, akutní toxoplazmózy a krevních chorob.
• Nervové formy listeriózy je třeba odlišit od bakteriálních meningitid různé etiologie – pneumokokové, meningokokové, stafylokokové.
• Listeriózu u těhotných žen je třeba odlišit od pomalé pyelocystitidy a pyelonefritidy.

Listerióza je nebezpečná bakteriální infekce. Informace od vědců.

Často kladené dotazy

Jaké příznaky naznačují možnou infekci listeriózou?

Infekce listeriózou se může projevovat různými příznaky, včetně horečky, bolesti svalů, bolesti hlavy, nevolnosti a průjmu. U těhotných žen může infekce vést k předčasnému porodu nebo infekci plodu.

Jaké metody lze použít k diagnostice listeriózy?

K diagnostice listeriózy lze použít různé metody, včetně technik krve, moči, stolice, kultivace a molekulární biologie.

Jaké jsou možné důsledky pozdní diagnózy listeriózy?

Opožděná diagnóza listeriózy může vést k závažným komplikacím zejména u těhotných žen a také u lidí s oslabeným imunitním systémem. Proto je důležité, pokud máte podezření na infekci listeriózou, neprodleně se poradit s lékařem.

Užitečné tipy

TIP #1

Při prvních známkách onemocnění, jako je horečka, bolest hlavy, svalů a průjem, kontaktujte svého lékaře.

TIP #2

Vyhněte se konzumaci nepasterizovaných mléčných výrobků a syrového masa, abyste předešli možné infekci listeriózou.

TIP #3

Příprava jídla by měla být prováděna s maximální opatrností, důkladně omýt zeleninu a ovoce a vyhnout se kontaktu se syrovými potravinami při vaření.